365bet备用

产品搜索
 

365bet备用官网
联系人:孟先生
联系电话:010-61210147
传真号码:010-83551731
移动电话:15313005355   18612351088
公司地址:北京市大兴区黄村东大街38号院3号楼11层1112室火神庙商业中心D座1112室
Email:zhishuduobao@126.com
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4

水迷宫-左归降糖解郁方改善糖尿病并发抑郁症大鼠抑郁样行为的作用及其机制

左归降糖解郁方改善糖尿病并发抑郁症大鼠抑郁样行为的作用及其机制

1 王宇红2  2  2  1  2 2 1

( 1  湖南中医药大学  **附属医院  中心实验室长沙    410007;

  2   湖南中医药大学  湖南省中药粉体与****省部共建国家重点实验室培育基地长沙 410007)


摘要: 目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠抑郁样行为的作用及其对细胞外信号调节蛋白激酶信号通路调节的影响方法 依次给予 SD 大鼠高脂乳剂灌胃与链脲佐菌素尾静脉注射和慢性不可预知应激的方法建立糖  尿病并发抑郁症动物模型按照体重将大鼠随机分为 5 组: 模型组对照组( 0. 18 g·kg 二甲双胍 + 1. 8 mg·kg  1 氟西汀) 、高中低 3 个剂量实验组( 左归降糖解郁方: 20. 5210. 265. 13  g·kg  1 ) 给药体积均为 10  mL·kg  1 连续给 4 周; 另设正常大鼠为正常组用开野实验检测各组大鼠抑郁行为用水迷宫实验检测大鼠的学习记忆功能用蛋白质**印迹法检测大鼠海马小鸟苷酸三 磷酸结合蛋白( as) 、细胞外信号调节激酶 1 /2 ( EK1 /2 ) 及其磷酸化蛋白p  EK1 /2环磷酸腺苷反应单元结合蛋白( CEB) 及其磷酸化蛋白 CEB 的表达结果 中药干预后在开野实验中的活动次数: 正常组模型组和高剂量实验组分别是( 47. 50 ± 15. 81) ( 7. 50 ± 5. 24) ( 21. 88 ± 14. 47)   次与正常组比较模型组差异有统计学意义( P  0. 01) ; 与模型组比较高剂量实验组差异有统计学意义( P  0. 05) 。在水迷宫实验中大鼠逃避潜伏期回归直线方程: 正常组模型组和高剂量实验组分别为 y = 66. 88   10. 76xy = 63. 56   5. 964x y = 67. 75  9. 51x与正常组比较模型组差异有统计学意义( P  0. 05) 与模型组比较高剂量实验组差异有统计学意义( P  0. 05) 。 3 组的探索时间分别为( 36. 63 ± 13. 39) ( 22. 25 ± 5. 42) ( 30. 75 ± 7. 92)   s与正常组比较模型组差异有统计学意义( P  0. 05) ; 与模型组比较高剂量实验组大鼠差异有统计学意义( P  0. 05 ) 。正常组模型组和高剂量实验组的 as 表达灰度值分别为0. 70 ± 0. 060. 08 ± 0. 030. 52 ± 0. 08这 3 组的 p  EK1 / EK1 的比值分别为0. 62 ± 0. 100. 20 ± 0. 030. 41 ± 0. 02这 3 组的 p  EK2 / EK2 的比值分别为0. 40 ± 0. 090. 29 ± 0. 090. 32 ± 0. 10这 3 组的 p  CEB / CEB 的比值分别为0. 60 ± 0. 100. 10 ± 0. 020. 46 ± 0. 08与正常组比较模型组差异均有统计学意义( P  0. 01 ) ; 与模型组比较高剂量实验组差异均有统计学意义( P  0. 01) ; 中低个剂量实验组仅 CEB / CEB 比值差异有统计学意义( P  0. 01P  0. 05) 结论   左归降糖解郁方可能通过有效调控 EK 信号通路激活 CEB从而改善糖尿病并发抑郁症大鼠的抑郁样行为

关键词: 左归降糖解郁方; 糖尿病并发抑郁症; 小鸟苷酸三磷酸结合蛋白; 细胞外信号调节激酶 1 /2; 环磷酸腺苷反应单元结合蛋白DOI: 10. 13699 / j. cnki. 1001 6821. 2017. 21. 021中图分类号: 975 文献标志码: A文章编号: 1001 6821( 2017) 21 2167 04据统计无论是 1 型还是 2 型糖尿病 4 人中就有 1 人有明显的抑郁症状1环磷酸腺苷反应元件结合蛋白( CEB) 的表达与抑郁症密切相关糖尿病大鼠脑内 CEB 及其磷酸化蛋白的表达水平显著下调且与大鼠的学习记忆损伤呈负相关2脑组织中的细胞外信号调节蛋白激酶( EK1 /2) 信号通路激活可刺激转录因子 CEB 磷酸化从而调控多种蛋白基因的表达 并影响大鼠的空间记忆能力 前文4研究结果显示左归降糖解郁方可显著增加糖尿病并发抑郁症大鼠海马脑源性神经营养因子( BDNF) 的表达因此本实验拟研究左归降糖解郁方的抗抑郁作用及其对 as  EK1 /2  CEB 信号通路的调控作用

材料与方法

1 材料

动物    SPF 级雄性 SD  大鼠180  220  g由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供动物许可证号: SCXK( 湘) 2013 0004药品与试剂 左归降糖解郁方( ZJJP: 由黄芪 18g贯叶连翘 3 g姜黄 9 g熟地黄 15 g山茱萸 12 g 12 g菟丝子 9 g杜仲 9 g丹参 12 g丹皮 6 g牛膝9 g 组成) ,原材料由湖南中医药大学**附属医院药剂科提供提取液相当于生药量为 1. 14 g·mL  1 ; 盐酸二甲双胍片规格: 每片 0. 25  g批号: 150123湖南湘雅制药有限公司生产; 盐酸氟西汀胶囊( 商品名: 百忧解) 规格: 每粒 20  mg批号: SS41A购自法国 Patheon公司; 链脲佐菌素( STZ) ,规格: 每支 100mg批号: 1122F031购自北京索莱宝公司小鸟苷酸三磷酸结合蛋白( as) 、ERK1 /2 及其磷酸化蛋白 ERK1 /2CREB 兔抗大鼠多克隆抗体购自美国 Cell Signaling公司; ERK1 /2 兔抗大鼠多克隆抗体购自美国 Proteintech 公司; 兔抗IgG  HP购自北京中杉金桥; Protein ECL 高敏化学发光试剂盒购自杭州联科生物技术有限公司

仪器 Open field 敞箱购自美国东乐自然基因生命科学公司; Morris 水迷宫购自365bet备用官网; 电泳仪购自美国 BIO AD 公司

2 实验方法

2. 1 建立糖尿病并发抑郁症动物模型4SD 大鼠灌胃给予高脂乳剂 14  d 后尾静脉注射STZ 溶液 38  mg· min  1 对照组给予等量柠檬酸缓4 ℃ 下 1. 2 × 104 r·min 1 离心 20 min测定总蛋白含量按照文献方法进行操作磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白均用TBST 洗3 次每次10 min用 ECL 化学发光法进行检测

3 统计学方法

数据分析采用  SPSS16. 0  统计软件计量资料以x珋± s表示各指标采用单因素方差分析( ANOVA) ,双侧 t 检验

1 比较几组大鼠给药前后的活动次数正常组模型组对照组高中低 3 个剂量实验组

( 47. 50 ±  15. 81 ) ,( 7. 50 ± 5. 24) ,( 34. 13  ± 21. 96 ) ,( 21. 88  ± 14. 47 ) ,( 16. 13 ± 10. 25 ) ( 15. 25  ± 14. 02 )   次与正常组比较模型组差异有统计学差异( P 0. 01) ; 与模型组比 对照组和高剂量实验组差异均有统计学差异P  0. 01P  0. 05 ) 表明二甲双胍和氟西汀的联合用药以及高剂量左归降糖解郁方均可显著改善模型大鼠的抑郁样行为增强其自主活动兴趣见表 1

2 比较几组大鼠给药前后的认知功能

正常组模型组对照组高中低3 个剂量实验组大鼠的逃避潜伏期的直线回归方程如下: y = 66. 88 10. 76x2 = 0. 77) ,y = 63. 56 - 5. 964x2 = 0. 35) ,y =68. 75 10. 25x ( 2 = 0. 92) ,y = 67. 75 9. 51x ( 2 =0. 80) ,y = 65. 19 - 6. 58x2  = 0. 59) ,y = 64. 69 - 5. 78x( 2 = 0. 51) 。与正常组比较模型组差异有统计学意义( P 0. 05) 。与模型组比较对照组和高剂量实验组差异均有统计学意义( P 0. 05) ,见表 2给药后第 5 天正常组模型组对照组高中低 3 ( 36. 63 ± 13. 39) ,( 22. 25 ± 5. 42) ,( 31. 25  ± 10. 25 ) ,( 30. 75 ± 7. 92) ,( 28. 00 ± 10. 14) ,( 27. 63 ± 7. 09) s。与正常组比较模型组差异有统计学意义( P 0. 05) 。与模型组比较对照组和高剂量实验组差异均有统计 学意义( P 0. 05) ,见表 2


比较几组大鼠给药前后 as 信号通路中相关蛋白表达的变化**干预后as 在大鼠海马中表达的灰度值: 正常组模型组对照组高中低 3 个剂量实验组分别为0. 70 ± 0. 06,0. 08  ± 0. 03,0. 59  ± 0. 03,0. 52  ± 0. 08,0. 16 ± 0. 050. 11  ± 0. 05; p  EK1 / EK1  在大鼠海马中的灰度值比: 6 组分别为 0. 62 ± 0. 10 0. 20 ± 0. 03,0. 56  ± 0. 12,0. 41  ± 0. 02,0. 21  ± 0. 03,0. 19 ± 0. 05; p ERK2 / ERK2: 6 0. 40 ± 0. 09,0. 29  ± 0. 09,0. 39  ± 0. 02,0. 32  ± 0. 10,0. 30 ± 0. 070. 27 ± 0. 05; p  CEB / CEB 表达: 这 6组分别为  0. 60  ± 0. 100. 10  ± 0. 020. 56  ± 0. 080. 46 ± 0. 08,0. 44 ± 0. 06,0. 33 ± 0. 11。与正常组比较模型组的 as 表达 ERK1 / ERK1  CREB / CREB 比值差异均有统计学意义( P  0. 01) 。与模型组比较对照组和高剂量实验组的 as 表达 ERK1 / ERK1 CREB / CREB 比值差异均有统计学意义( P  0. 01) ; 中低 2 个剂量实验组仅 CREB / CREB 比值差异均有统计学意义( P  0. 01P  0. 05) 结果提示西药联合用药和左归降糖解郁方高剂量均可有效调节模型大鼠海马内 as 信号通路表略

讨 论

本实验结果发现予左归降糖解郁方对 CREB 的磷酸化水平调节作用较为明显由此推测左归降糖解郁方改善糖尿病并发抑郁症大鼠的抑郁样行为和认知行为可能与其有效调节大鼠海马 CREB 磷酸化水平密切相关BDNF 基因的启动子区内含有 CRE 序列可接受 CEB 的调控6-7因此推测左归降糖解郁方对海马神经营养因子的作用可能也与其调控CREB 磷酸化水平有关

本实验结果发现糖尿病并发抑郁症模型的大鼠海马 as 表达显著减少 EK1 / EK1  比例下降;而给予左归降糖解郁方后as 表达增多 EK1 / ERK1 比例上调显著

本实验结果证明左归降糖解郁方可显著改善糖 尿病并发抑郁症大鼠的抑郁样行为和学习认知能力 其抗抑郁作用可能与其调节大鼠海马 CREB 相关信号通路有关